940101 Molekularbiologie Übungen I


Art
Übung
Semesterstunden
3
Vortragende/r (Mitwirkende/r)
Hauser, Marie-Theres , Steinkellner, Herta , Grabherr, Reingard , Rüker, Florian , Luschnig, Christian , Krautloher, Jana Milena , Narendja, Lukas , Schoberer, Jennifer , Sorz, Yvonne , Simak, Theodor , Schubert, Fabian , Tonar, Dominik , Gorecki, Pawel , Sinner, Julia , Duric, Stella , Strasser, Richard
Organisation
Angeboten im Semester
Wintersemester 2021/22
Unterrichts-/ Lehrsprachen
Deutsch

Lehrinhalt

Der Lehrstoff beinhaltet zwei Beispiele, an denen grundlegende molekularbiologische Methoden näher gebracht werden sollen.

Im Beispiel "Genotyp" wird genomische DNA (DNS) aus Stiersperma gereinigt und anschließend ein bestimmtes Gen (kappa-Casein Gen) charakterisiert. In diesem Beispiel stehen vier wichtige Methoden im Vordergrund: (i) die sogenannte PCR (Polymerase-Kettenreaktion), diese erlaubt eine spezifische Verfielfältigung von bestimmten DNA Abschnitten; (ii) Southern-blotting, welche einen sensitiven und spezifischen Nachweis von größenfraktinierten DNA-Fragmenten ermöglicht, (iii) DNA-Sequenzanalyse und (iv) Sequenzanalyse mittels verschiedener Datenbanken.

Im "E. coli" Experiment lernen die Studenten den Einsatz einer Reihe von Enzymen kennen die verwendet werden, um DNA Abschnitte zu verändern, um diese somit leichter im Labor zu bearbeiten. Weiters erlernen die Studenten den Umgang mit dem Modellorganismus E. coli, und dessen Einsatz für molekularbiologische Arbeiten. In diesem Beispiel stehen folgende wichtige Methoden im Vordergrund: (i) Einsatz Restriktionendonukleasen zum Schneiden von DNA, (ii) Manipulation von linearisierten DNA Fragmenten, (iii) Erzeugen von sogenannten kompetenten Zellen, (iv) Transformation von E.coli, (v) Blau-weiss screenen mit Hilfe des lacZ Genes, (vi) Analyse der Transformanten mittels Agarose-Gelelektrophorese.
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Inhaltliche Voraussetzungen (erwartete Kenntnisse)

"Introduction to Molecular Biology (in Eng.)" (941105)
"Allgemeinen Mikrobiologie Übungen" (791128)

Lehrziel

Die AbsolventInnen der Lehrveranstaltung

- verstehen die grundlegenden Methoden der Klonierung eines Reportergens in ein bakterielles Plasmid
- können eine in silico Klonierung durchführen
- können das Ergebnis der Ligation und E.coli Transformation interpretieren
- können eine Transformationseffizienz errechnen
- können den Erfolg der Klonierung mittels PCR, Plasmid-Preparation, Restriktionsverdau und Agarosegel-Elektrophorese untersuchen
- können die Expression des Reportergens mittels Messung der Fluoreszenz-Emission bestimmen
- erkennen die kritischen Faktoren, welche die Expression eines Gens in Bakterien beeinflussen
- können durch vergleichende Bezugnahme die erhaltenen Ergebnisse der Klonierung und Genexpression beurteilen
- führen eine Genotypisierung eines Organismus mittels Herstellung und Nachweis von unterschiedlich langen DNA-Fragmenten durch
- haben grundlegende Kenntnis von Methoden zur Reinigung von genomischer DNA aus eukaryotischen Zellen
- wissen über die Theorie und praktische Durchführung der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Bescheid
- können die Southern Blot Methode zum Nachweis von bestimmten DNA-Sequenzen verwenden
- können vergleichende DNA-Sequenzanalysen mittels Datenbanken durchführen
- können die Ergebnisse und deren praktische Relevanz hinterfragen
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Noch mehr Informationen zur Lehrveranstaltung, wie Termine oder Informationen zu Prüfungen, usw. finden Sie auf der Lehrveranstaltungsseite in BOKUonline.